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ELISA操作指南:從板子準(zhǔn)備到結(jié)果分析
更新時(shí)間:2025-10-23瀏覽:94次

  ELISA操作指南:從板子準(zhǔn)備到結(jié)果分析

  以下是ELISA實(shí)驗(yàn)從板子準(zhǔn)備到結(jié)果分析的完整操作指南,結(jié)合高可信度來(lái)源和富媒體資源整理:

  一、實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備

  試劑與耗材?

  需準(zhǔn)備包被板、標(biāo)準(zhǔn)品、生物素化抗體、酶標(biāo)二抗、TMB顯色液及終止液等?

  試劑需室溫平衡1小時(shí),凍存樣本需4℃緩慢解凍?

  樣本處理?

  血清/血漿需3000×g離心15分鐘去除纖維蛋白,細(xì)胞上清需0.22μm過濾?

  建議進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)確定最佳稀釋比例(通常5-10倍梯度稀釋)?

  二、實(shí)驗(yàn)操作流程

  包板與封閉?

  用碳酸鹽緩沖液(pH 9.6)稀釋抗原/抗體(1-10 μg/mL),每孔加100μL,4℃過夜或37℃孵育2小時(shí)?

  封閉液推薦5% BSA或脫脂奶粉,室溫孵育1-2小時(shí)?

  加樣與孵育?

  標(biāo)準(zhǔn)品需2倍稀釋系列(如640pg/ml至0pg/ml),每濃度設(shè)2個(gè)復(fù)孔

  樣本與標(biāo)準(zhǔn)品加樣需在15分鐘內(nèi)完成,37℃孵育30-60分鐘?

  洗滌關(guān)鍵步驟?

  每孔加300μL洗滌液,震蕩浸泡1-2分鐘,重復(fù)3-5次,拍干時(shí)避免液體殘留?

  三、顯色與讀數(shù)

  顯色反應(yīng)?

  每孔加100μL TMB底物,避光孵育5-30分鐘(顯色梯度需肉眼觀察)?

  終止液(如2M硫酸)加入后15分鐘內(nèi)用酶標(biāo)儀測(cè)450nm吸光值?

  結(jié)果分析?

  標(biāo)準(zhǔn)曲線需R2>0.99,樣本OD值需在標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍內(nèi)?

  陽(yáng)性判定:樣本OD值>陰性對(duì)照2.1倍?

  常見問題處理

  高背景?:可能因洗滌不充分或封閉不足,需增加洗滌次數(shù)或更換封閉液?

  顯色異常?:檢查底物有效期或孵育時(shí)間,避免氣泡干擾?

  注:以上僅供參考,不作為實(shí)際數(shù)據(jù),實(shí)驗(yàn)需嚴(yán)格遵循說明或咨詢技術(shù)老師。

  天津本生一直視質(zhì)量控制為企業(yè)的生命,追求企業(yè)競(jìng)爭(zhēng)力的不斷提升。公司在經(jīng)營(yíng)中始終秉承:遵紀(jì)守法,嚴(yán)于律己,寬仁以待,敢于承擔(dān)的企業(yè)精神作為標(biāo)準(zhǔn),以過硬的質(zhì)量和優(yōu)良的服務(wù)來(lái)維護(hù)和拓展市場(chǎng),較大限度的滿足客戶的需求。與客戶的共贏,是我們的發(fā)展目標(biāo),本生,您信任的合作伙伴!

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