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ELISA樣本稀釋操作指南:原理、方法與優(yōu)化技巧
更新時間:2025-10-21瀏覽:132次

  ELISA樣本稀釋操作指南:原理、方法與優(yōu)化技巧

  ELISA樣本稀釋操作指南

  一、稀釋原理

  ELISA樣本稀釋的核心是通過精確的濃度梯度調(diào)整,使待測樣本的OD值落在標準曲線線性范圍內(nèi)(通常為最高標準品OD值的50%-80%)?。稀釋不足會導致信號飽和,過度稀釋則可能降低檢測靈敏度?。關鍵是通過預實驗確定樣本基質(zhì)效應,選擇適當?shù)南♂屢?如1×PBS或?qū)S孟♂尵彌_液)以保持抗原-抗體結合活性?。

  二、標準操作方法

  標準品稀釋?

  采用倍比稀釋法:原液按1:2、1:4等比例逐級稀釋,推薦濃度梯度覆蓋檢測范圍(如1000 pg/mL至15.6 pg/mL)?。

  使用校準移液器,每步混勻后取150-300μL轉(zhuǎn)移至下一管,避免氣泡殘留?。

  樣本稀釋?

  血清/血漿樣本需用稀釋緩沖液至少稀釋2倍,細胞上清建議1:1稀釋?。

  高濃度樣本需預實驗確定最佳稀釋倍數(shù),確保OD值接近標準曲線中段?。

  三、優(yōu)化技巧

  稀釋液選擇?:含0.05% Tween-20的PBS可減少非特異性結合,脫脂牛奶(5%)適合封閉高背景樣本?。

  避免誤差?:使用帶濾芯槍頭防止交叉污染,手工洗板時拍干孔內(nèi)液體?。

  質(zhì)控驗證?:每板需含空白孔和陰性對照,標準曲線R2值需>0.99?。

  四、常見問題處理

  假陽性/陰性?:檢查樣本是否溶血或脂血,避免反復凍融?。

  信號異常?:確認酶標試劑現(xiàn)配現(xiàn)用,顯色時間控制在15-30分鐘?。

  通過規(guī)范操作和優(yōu)化策略,可顯著提升ELISA檢測的準確性和重復性?。

  注:以上僅供參考,不作為實際數(shù)據(jù),實驗需嚴格遵循說明或咨詢技術老師。 Elisa試劑盒

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