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0.1mL 96孔PCR板使用指南
1. ?耗材選擇與適配性?
材質(zhì)與規(guī)格?：選擇聚丙烯(PP)材質(zhì)、0.1mL容積的96孔板，確保與熒光定量PCR儀(如ABI 7500fast、Roche 480等)的加熱模塊匹配?。
顏色與裙邊?：
透明板適用于底部光源儀器，乳白色板(如伯樂CFX系列)適合頂部熒光采集?。
根據(jù)儀器需求選擇無(wú)裙邊、半裙邊或全裙邊設(shè)計(jì)，避免因邊緣凸起導(dǎo)致加熱不均?。
2. ?實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備?
環(huán)境控制?：在超凈臺(tái)或生物安全柜中操作，紫外線消毒30分鐘以上，使用無(wú)核酸酶槍頭/離心管?。
樣本布局?：優(yōu)先使用中間60孔(棄用邊緣孔)，縱向排列樣本以減少熱蓋壓力不均影響?。
3. ?加樣與密封?
加樣技巧?：
每孔反應(yīng)體系10-20μL，采用反向移液法(高粘度樣本)或正向移液法(常規(guī)樣本)，誤差控制在±1%內(nèi)?。
加樣后瞬時(shí)離心(1000rpm×10s)消除氣泡?。
密封方法?：使用光學(xué)膜密封，先縱向壓膜，再橫向按壓邊緣，確保無(wú)漏液?。
4. ?上機(jī)與擴(kuò)增?
儀器設(shè)置?：確認(rèn)溫度、循環(huán)數(shù)、熒光采集參數(shù)與試劑盒說(shuō)明書一致，注意是否需ROX參比染料?。
耗材檢查?：避免使用普通PCR耗材(透光性差)或錯(cuò)誤規(guī)格的板(如0.2mL板用于0.1mL模塊)，防止熱傳導(dǎo)不均或假陰性?。
5. ?常見問題與解決?
擴(kuò)增異常?：若曲線異常，檢查耗材質(zhì)量(如封膜變形導(dǎo)致光學(xué)扭曲)、試劑有效期及凍融次數(shù)?。
蒸發(fā)控制?：密封不嚴(yán)會(huì)導(dǎo)致ROX熒光上抬，需確保封膜緊密?。
6. ?注意事項(xiàng)?
一次性使用?：PCR板不可重復(fù)使用或剪開，避免交叉污染和實(shí)驗(yàn)誤差?。
存儲(chǔ)條件?：未開封試劑盒建議2-8℃保存，部分組分需-20℃避光?。
注：以上僅供參考，科研使用，不作為實(shí)際數(shù)據(jù)，實(shí)驗(yàn)需嚴(yán)格遵循說(shuō)明或咨詢技術(shù)老師。
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