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ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)中會(huì)遇到很多問題
更新時(shí)間:2025-08-05瀏覽:278次

  

  以下是ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)中常見問題及解決方案的總結(jié),天津本生技術(shù)小編結(jié)合實(shí)驗(yàn)操作關(guān)鍵環(huán)節(jié)進(jìn)行分類說(shuō)明:

  一、?樣本處理問題?

  溶血/脂血干擾?

  現(xiàn)象?:背景值升高或結(jié)果異常。

  解決?:血液樣本需靜置1-2小時(shí)后離心(3000×g,15分鐘),避免劇烈震蕩;脂血樣本建議超速離心或過濾。

  反復(fù)凍融影響?

  現(xiàn)象?:靶蛋白降解導(dǎo)致信號(hào)減弱。

  解決?:樣本分裝保存(-20℃或-70℃),凍融≤3次。

  二、?加樣與孵育問題?

  加樣誤差?

  現(xiàn)象?:復(fù)孔差異大(CV>15%)。

  解決?:使用校準(zhǔn)后的移液器,垂直加樣避免氣泡;高濃度樣本優(yōu)先稀釋。

  孵育不充分?

  現(xiàn)象?:信號(hào)弱或無(wú)信號(hào)。

  解決?:確保37℃孵育時(shí)間準(zhǔn)確(誤差±5分鐘),微孔板加蓋防蒸發(fā)。

  三、?洗滌問題?

  洗板不凈?

  現(xiàn)象?:高背景或非特異性結(jié)合。

  解決?:手工洗板需注滿每孔,靜置1分鐘后甩干;自動(dòng)洗板機(jī)需定期維護(hù)噴頭。

  洗滌液殘留?

  現(xiàn)象?:孔底液體影響OD值。

  解決?:甩板后倒扣于吸水紙上輕拍。

  四、?顯色與檢測(cè)問題?

  顯色異常?

  現(xiàn)象?:顯色過快(底物污染)或過慢(酶失活)。

  解決?:TMB避光保存,現(xiàn)配現(xiàn)用;終止后10分鐘內(nèi)讀數(shù)。

  標(biāo)準(zhǔn)曲線不佳?

  現(xiàn)象?:R2<0.95或線性差。

  解決?:標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶后渦旋混勻,避免凍干粉殘留;建議雙對(duì)數(shù)擬合曲線。

  五、?其他高頻問題?

  “白板"現(xiàn)象?

  原因?:酶標(biāo)抗體失效或漏加。

  解決?:檢查試劑有效期,按順序添加酶標(biāo)抗體。

  邊緣效應(yīng)?

  原因?:溫育溫度不均。

  解決?:孵育時(shí)避免疊放板條,確保熱空氣流通。

  六、?預(yù)防性措施?

  試劑管理?:未使用板條需密封保存(含干燥劑),避免受潮。

  質(zhì)控設(shè)置?:每板需包含陰/陽(yáng)性對(duì)照和空白孔。

  設(shè)備校準(zhǔn)?:定期校驗(yàn)酶標(biāo)儀波長(zhǎng)(如450nm±2nm)和移液器精度。

  注:若問題持續(xù),建議聯(lián)系試劑盒廠家提供標(biāo)準(zhǔn)操作視頻或技術(shù)支持。

  注:以上資料僅供參考,具體詳情來(lái)咨詢技術(shù) 老師或品牌供應(yīng)商。

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