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BUNSEN酶聯(lián)免疫試劑盒工作原理及實(shí)驗(yàn)操作步驟
更新時(shí)間:2023-11-07瀏覽:692次

  BUNSEN酶聯(lián)免疫試劑盒工作原理及實(shí)驗(yàn)操作步驟


  酶聯(lián)免疫試劑盒是基于經(jīng)典酶聯(lián)夾心技術(shù)原理,能測量人促卵泡素(FSH),只能用于研究用途,不得用于醫(yī)學(xué)診斷。

  酶聯(lián)免疫試劑盒工作原理:

  促卵泡素(FSH)是動(dòng)物腦垂體分泌作用于卵巢卵泡生長、發(fā)育、分化、成熟和排卵的重要繁殖激素.由于是生物大分子,不能透過細(xì)胞膜,FSH必須與靶細(xì)胞膜上的促卵泡素受體(FSHR)結(jié)合,經(jīng)過受體介導(dǎo)將信息傳遞到靶細(xì)胞內(nèi),才能發(fā)揮其生物學(xué)功能.所提供的ELISA Kit是典型的夾心法酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒(ELISA)。預(yù)先包被的抗體為多克隆抗體。檢測相抗體也為多克隆抗體,經(jīng)生物素(biotin)標(biāo)記。樣品和生物素標(biāo)記抗體先后加入酶標(biāo)板孔反應(yīng)后,PBS或TBS洗滌。隨后加入過氧化物酶標(biāo)記的親和素反應(yīng);經(jīng)過PBS或TBS的*洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的待測因子呈正相關(guān)。

  

本生試劑盒


  酶聯(lián)免疫試劑盒工作環(huán)境:

  1. 37℃恒溫箱。

  2. 標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀。

  3. 自動(dòng)洗板機(jī)。

  4. 單通道或多通道可調(diào)節(jié)移液器以及其吸頭。

  5. 蒸餾水,容量瓶等

  6. 干凈的試管和Eppendof管

  BUNSEN酶聯(lián)免疫試劑盒操作步驟:

  1. 確定本次檢測所需的已包被抗體的酶標(biāo)板孔數(shù)目。

  2. 將倍比稀釋的標(biāo)準(zhǔn)品各0.1ml依次加入一排7孔中,1孔只加樣品稀釋液的作為對(duì)照。處理后的標(biāo)本按100ul每孔加入。

  3. 酶標(biāo)板加上蓋,37℃反應(yīng)90分鐘。

  4. 反應(yīng)后用自動(dòng)洗板機(jī)吸去酶標(biāo)板內(nèi)的液體;或甩去酶標(biāo)板內(nèi)液體,再對(duì)著吸水紙拍幾下。洗滌2次。

  5. 將準(zhǔn)備好的生物素抗體工作液按每孔0.1ml依次加入。37℃反應(yīng)60分鐘。

  6. 0.01M TBS或0.01M PBS洗滌3次,每次浸泡1分鐘左右。

  7. 將準(zhǔn)備好的ABC工作液按每孔0.1ml依次加入。37℃反應(yīng)30分鐘。

  8. 0.01M TBS或0.01M PBS洗滌5次,每次浸泡1-2分鐘左右。

  9. 按每孔0.1ml依次加入TMB顯色工作液,37℃避光反應(yīng),反應(yīng)過程中,要經(jīng)常的觀察,當(dāng)肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的3-4孔有 明顯的梯度藍(lán)色,后3-4孔差別不明顯時(shí),即可加入TMB終止液0.1ml/孔。(顯色反應(yīng)zui長不要超過30分鐘)。

  10. 用酶標(biāo)儀在450nm測定O.D.值。

  11. 根據(jù)樣品的吸光值在坐標(biāo)上找出對(duì)應(yīng)的濃度。用戶也可以使用各種應(yīng)用軟件來計(jì)算。應(yīng)記住由于樣品稀釋了N倍,其實(shí)際濃度應(yīng)該×N。

  酶聯(lián)免疫試劑盒本生一直視質(zhì)量控制為企業(yè)的生命,追求企業(yè)競爭力的不斷提升。公司在經(jīng)營中始終秉承:遵紀(jì)守法,嚴(yán)于律己,寬仁以待,敢于承擔(dān)的企業(yè)精神作為標(biāo)準(zhǔn),以過硬的質(zhì)量和優(yōu)良的服務(wù)來維護(hù)和拓展市場,較大限度的滿足客戶的需求。與客戶的共贏,是我們的發(fā)展目標(biāo)。本生!您信任的合作伙伴。我們?cè)概c您真誠合作,共創(chuàng)美好的未來。本生實(shí)驗(yàn)耗材

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