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細胞培養(yǎng)小知識,你知道嗎?
更新時間:2023-10-12瀏覽:1236次

  細胞培養(yǎng)小知識,你知道嗎?


  什么是細胞培養(yǎng)呢?

  細胞培養(yǎng)是指從動物或植物中取出細胞,然后使其在合適的人工條件下生長。這些細胞可于培養(yǎng)前直接從組織中取出來并采用酶或機械方法進行解離,或者也可來自已經(jīng)建立的細胞系或細胞株。

  接下來我們一起跟隨BUNSEN本生了解一些細胞培養(yǎng)中的小技巧:

  1、冷凍管該如何解凍? 取出冷凍管后,須立即放入37°C水槽中快速解凍,輕搖冷凍管使其在1分鐘內全部融化,并注意水面不可超過冷凍管蓋沿,否則易發(fā)生污染情形。另冷凍管由液氮桶中取出解凍時,必須注意安全,預防冷凍管爆裂。

  2、細胞冷凍管解凍培養(yǎng)時,是否應馬上去除DMSO? 除少數(shù)特別注明對DMSO 敏感的細胞外,絕大部分細胞株(包括懸浮性細胞),在解凍之后,應直接放入含有10-15ml新鮮培養(yǎng)基的培養(yǎng)角瓶中,待隔天再置換新鮮培養(yǎng)基以去除DMSO 即可,如此可避免大部分解凍后細胞無法生長或貼附的問題。




  3、可否使用與原先培養(yǎng)條件不同的培養(yǎng)基? 不能。每一細胞株均有其特定使用且已適應的細胞培養(yǎng)基,若驟然使用和原先提供的培養(yǎng)條件不同的培養(yǎng)基, 細胞大都無法立即適應,造成細胞無法存活。

  4、可否使用與原先培養(yǎng)條件不同的血清種類? 不能。血清是細胞培養(yǎng)上一個極為重要的營養(yǎng)來源,所以血清的種類和品質對于細胞的生長會產(chǎn)生極大的影響。來自不同物種的血清,在一些物質或分子的量或內容物上都有所不同,血清使用錯誤常會造成細胞無法存活。

  5、何謂FBS,FCS,CS,HS? FBS(fetal bovine serum)和FCS(fetal calf serum)是相同的意思,兩者都是指胎牛血清,F(xiàn)CS乃錯誤的使用字眼,請不要再使用。CS(calf serum)則是指小牛血清。HS(horseserum)則是指馬血清。

  6、培養(yǎng)細胞時應使用5%或10%CO2?或根本沒有影響? 一般培養(yǎng)基中大都使用HCO3-/CO32-/H+作為pH的緩沖系統(tǒng),而培養(yǎng)基中NaHCO3 的含量將決定細胞培養(yǎng)時應使用的CO2濃度。當培養(yǎng)基中NaHCO3含量為每公升3.7g時,細胞培養(yǎng)時應使用10%CO2;當培養(yǎng)基中NaHCO3為每公升1.5g時,則應使用5%CO2培養(yǎng)細胞。

  7、何時須更換培養(yǎng)基? 視細胞生長密度而定,或遵照細胞株基本數(shù)據(jù)上之更換時間,按時更換培養(yǎng)基即可。

  8、培養(yǎng)基中是否須添加抗生素? 除于特殊篩選系統(tǒng)中外,一般正常培養(yǎng)狀態(tài)下,培養(yǎng)基中不應添加任何抗生素。

  9、附著性細胞繼代時所使用的trypsin-EDTA濃度?應如何處理? 一般使用的trypsin-EDTA濃度為0.05% trypsin-0.53mMEDTA.4 Na。*次開瓶后應立即少量分裝于無菌試管中,保存于-20°C,避免反復冷凍解凍造成trypsin 的活性降低,并可減少污染的機會。

  10、懸浮性細胞應如何繼代處理? 一般僅需持續(xù)加入新鮮培養(yǎng)基于原培養(yǎng)角瓶中,稀釋細胞濃度即可,若培養(yǎng)液太多時,可將培養(yǎng)角瓶口端稍微抬高,直到無法容納為止。分瓶時取出一部份含細胞之培養(yǎng)液至另一新的培養(yǎng)角瓶,加入新鮮培養(yǎng)基稀釋至適當濃度,重復前述步驟即可。

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