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實驗干貨——PCR試劑盒注意事項與原則
更新時間:2023-04-04瀏覽:1320次

  實驗干貨——PCR試劑盒注意事項與原則


  PCR試劑盒注意事項:

 ?、偌尤朐噭┑捻樞颍员WC所有反應板孔溫育的時間一樣。

 ?、谑褂酶蓛舻乃芰先萜髋渲孟礈煲骸?/p>

 ?、郯凑针u血紅蛋白(HB)ELISA檢測試劑盒說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。

  ④底物A應揮發(fā),避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。

 ?、菹礈?strong>酶標板時應充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。

 ?、奘褂靡淮涡缘奈^以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器 。

  ⑦實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。

 ?、嘣噭礃撕炚f明書儲存,使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄,不可保存。

  ⑨不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。

  PCR試劑盒原則:

  ①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。

 ?、谝飻U增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。

  ③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。

 ?、鼙苊庖飪?nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴增條帶。

 ?、菀?'端的堿基,特別是末及倒數(shù)第二個堿基,應嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。

 ?、抟镏杏谢蚰芗由虾线m的酶切位點, 被擴增的靶序列有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。

  ⑦引物的特異性:引物應與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。

  ELISA試劑盒 本生(天津)健康科技有限公司產(chǎn)品涵蓋有熒光定量PCR耗材(八聯(lián)管,單管,96孔板,384孔板,封板膜,輔助器等),ELISA試劑盒,移液器吸嘴,離心管,凍存管,培養(yǎng)皿,培養(yǎng)板,培養(yǎng)瓶,吸頭,儀器及手套,培養(yǎng)基,抗體,血清,色譜耗材,針頭過濾器及實驗室常用耗材。 品種類超過萬種,廣泛應用于科研院校、中心實驗室、分子生物學等科研領(lǐng)域。

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